L'enzima converte il fosfato 3′-terminale di vari substrati di RNA nel fosfodiestere ciclico 2 ′, 3′ in una reazione dipendente dall'ATP. La catalisi avviene mediante un meccanismo a tre fasi, a partire dall'attivazione dell'enzima da parte dell'ATP, che forma un legame fosforammidico tra l'adenilato e un residuo di istidina [5,6]. Il gruppo adenilato viene quindi trasferito all'estremità 3′-fosfato del substrato, formando la struttura ricoperta [RNA] -3 ′ - (5′-difosfoadenosina). Infine, l'enzima catalizza un attacco del vicinale O-2 ′ sul 3′-fosforo, che si traduce nella formazione di fosfato ciclico e nel rilascio dell'adenilato. L'enzima ha anche un'attività di adenilazione del polinucleotide 5 '[7].? Cf. EC? 6.5.1.5, RNA 3'-terminale-fosfato ciclasi (GTP).
